用于qPCR定量检测NGS文库

Features

以芯片规格提供预分装的即用型、梯度稀释DNA标准品

自动计算文库浓度

实验方案简便、灵敏度高、动态范围宽

与Illumina和Ion Torrent/Proton NGS平台兼容

与多数qPCR仪兼容

Product Details

GeneRead Library Quant System为NGS文库制备提供简便的解决方案，确保NGS实验获得可靠结果。GeneRead Library Quant System采用real-time PCR技术，特异性定量检测两端有测序接头的DNA分子。

Performance

使用两种浓度的NGS文库，将GeneRead Library Quant System的灵敏度和动态范围与Agilent's High Sensitivity DNA Kit进行对比。第一个文库使用这两种试剂盒皆可进行定量检测，但浓度较低的第二个文库低于Agilent's 2100 BioAnalyzer的最低检测阈限。相反，GeneRead Library Quant Array能够对这两种不同浓度的文库进行成功的定量检测。

Principle

准确定量文库对于NGS平台的高效使用十分重要。但是，当前的分光广度法只能检测总核酸浓度。GeneRead Library Quant System则采用real-time PCR技术，仅定量检测两端有接头的DNA分子。只有两端有接头的DNA分子才能在乳液PCR（Ion Torrent）或桥式PCR（Illumina）中得到扩增，因此此方法能够准确定量检测可扩增的文库DNA。real-time PCR灵敏性高，能够定量检测低浓度文库，甚至是浓度低于传统分光光度法的检测阈限。

GeneRead Library Quant System提供管装和芯片规格，经过优化，适合配合GeneRead qPCR SYBR Green Mastermixes使用，具有出色的灵敏性和宽泛的动态范围。两种规格都提供适合Illumina或Ion Torrent平台的DNA标准品。芯片规格提供分装的5个浓度的10倍梯度稀释标准品，混合有PCR引物，一式三份。确保您的样本文库在检测范围之中。

Procedure

芯片工作流程使用两个10倍稀释的样本文库，确保其浓度在梯度稀释的DNA标准品检测范围内。将样本与Generead qPCR SYBR Green Mastermix混合，等分为三份，加入芯片中。进行PCR，将原始CT数据导出至提供的数据分析Excel文件中，进行文库浓度的自动计算（Illumina）或模板稀释因子计算（Ion Torrent/Proton）。

管装标准品的工作流程与芯片的工作流程相似，仅有少数不同。先制备5个10倍梯度稀释的DNA标准品，以及2个10倍梯度稀释的样本文库。这样可确保文库的浓度在标准品稀释液范围之内。下一步，将稀释的DNA标准品和样本文库与提供能够的PCR试剂和相应的GeneRead qPCR SYBR Green Mastermix混合。进行PCR，将原始CT数据导出至提供的数据分析Excel文件中，进行文库浓度的自动计算（Illumina）或模板稀释因子计算（Ion Torrent/Proton）。

Applications

GeneRead Library Quant Array和GeneRead Library Quant Kit能够在使用Illumina或Ion Torrent/Proton NGS平台测序前，快速、准确的检测样本文库浓度。