从固定和稳定于PAXgene Tissue Containers的组织中纯化miRNA和总RNA

Features
    固定、稳定、纯化的整体系统
    高效纯化miRNA和总RNA
    从组织中抽提高品质的miRNA
    保持组织形态

Product Details

PAXgene Tissue miRNA Kit用于从固定和稳定于PAXgene Tissue Containers的组织中纯化总RNA，包括大于18 nt的RNA，纯化基于离心柱形式的硅胶膜RNA纯化技术。固定和储存于PAXgene Tissue Containers的组织样本可以是石蜡包埋的，用于病原体研究和后续的RNA、miRNA和/或DNA纯化。配合容器，该试剂盒为分子分析提供从采样、固定和稳定到高品质miRNA和总RNA纯化的完整解决方案。

Performance

采集器和试剂盒配合使用，构成分子分析中组织采集、固定和稳定，高品质RNA纯化，包括miRNA的分析完整解决方案。
使用PAXgene Tissue miRNA Kit纯化的总RNA纯度非常高。将基因组DNA污染降至最低，纯化所得RNA可直接用于下游分析，无可检测到PCR抑制物。该试剂盒可分离出所有大于18nt的RNA分子。

Principle

当前传统组织学中的组织固定方法对于分子分析来说应用是有限的。含有福尔马林的固定剂与生物分子交联，修饰核酸和蛋白质。在组织固定、储存和处理过程中，交联导致核酸降解。因为无法完全去除交联，其引起的化学修饰将限制敏感的下游应用，如定量PCR或RT-PCR。为了实现对同一样本进行分子病理检测和传统病理检测，需要一种方法在固定分子的同时保存组织形态。
PreAnalytiX研制了PAXgene Tissue System以满足这些需求。该系统包括组织采集装置（PAXgene Tissue Container用于采集、稳定、储存及运输人类样本组织）以及用于纯化总RNA、DNA或miRNA的试剂盒。PAXgene Tissue Containers可进行组织固定，用于组织病理学研究；也可从同一样本中纯化高纯度核酸，用于分子分析。固定和稳定方法保持了组织形态学，福尔马林固定组织中同时存在没有破坏性交联和降解的完整核酸。
为了纯化总RNA，包括miRNA，该系统需要应用PAXgene Tissue Containers采集和稳定组织，然后应用PAXgene Tissue miRNA Kit分离和纯化RNA。

Procedure

PAXgene Tissue Containers是预装有2种试剂的双腔容器。PAXgene Tissue Fix快速浸润并固定组织。固定之后，将其从PAXgene Tissue Fix中移出，转移到同一容器中含有PAXgene Tissue Stabilizer稳定液的另外一个腔内。组织被储存在PAXgene Tissue Stabilizer稳定液中，其核酸和组织形态可在室温下稳定3–7天，在2–8℃下可稳定2–4周，不同组织的保存时间不同。储存于-15–-30℃时，组织形态和核酸完整性可能稳定至少26个月。

固定了的样本可包埋于石蜡中，用于组织学研究。从PAXgene Tissue固定的组织样本中纯化核酸可在石蜡包埋之前或之后进行。

PAXgene Tissue miRNA Kit提供3种不同操作方案，用于从PAXgene Tissue Containers固定和稳定的组织中提取总RNA，包括小于200nt的RNA分子，例如5.8S rRNA、5S rRNA、tRNAs和miRNAs。经优化的结合和洗涤条件确保纯化小至18nt的RNA分子。作为先决条件，组织必须固定并稳定于PAXgene Tissue Containers中。

在结合缓冲液、Buffer TM1中破碎并匀质化组织样品。离心之后去除细胞碎片，在裂解液中添加乙醇确保可结合所有18nt以上的RNA。然后将样品放至PAXgene RNA MinElute离心柱上，总RNA结合到膜上，污染物被有效洗脱。在两次洗涤步骤之间，用DNase I处理膜，去除少量结合的DNA。洗涤之后，用低盐洗脱液洗脱包含miRNA的RNA，并加热使RNA变性。

在PAXgene Tissue Fix和PAXgene Tissue Stabilizer中固定和贮存组织样品的条件是使用动物组织确定的。

Applications

纯化所得miRNA和总RNA可即用于各种下游应用：

    Northern印迹分析
    RT-PCR和定量real-time RT-PCR
    微阵列分析