JaICA高灵敏度8-OHdG Check ELISA试剂盒适用样品包括组织，细胞培养，血清/血浆，尿液，本文介绍8-OHdG检测前的组织/细胞培养样品预处理程序（点击这里查看8-OHdG检测血清/血浆样品预处理程序）。

这是检测组织样品或培养细胞中的8-OHdG的应用示例。实验条件应由每个用户确定。

1. 从细胞中提取DNA

使用DNA提取试剂盒从匀浆中提取DNA。请遵照产品说明书操作。

以下是适用于8-OHdG检测的DNA提取试剂盒，可从WAKO Chemicals USA Inc.和WAKO Chemicals GmbH（德国）获得。

1）DNA提取® WB试剂盒（碘化钠的方法）：目录号291-50502

2）DNA提取® TIS试剂盒（碘化钠的方法）：目录号296-67701

3）的8-OHdG检测制剂试剂组：目录号292- 67801

2. DNA浓度和纯度的计算

   a） 用TE缓冲液将DNA溶液稀释至20-50 µg / mL。

   b） 在230nm，260nm，280nm和320nm波长处测量吸光度。

   C） 计算DNA浓度。（260nm处的吸光度1.0等于50 µg / mL DNA）

DNA浓度（µg / mL）=（260nm处的吸光度）*（50 µg / mL）*稀释率

   d） 检查DNA样品的纯度。

（260nm处的吸光度）：（280nm处的吸光度）之比通常在1.8至1.85之间。

分离的DNA的纯度通过（在260nm处的吸光度）与（在230nm处的吸光度）之比评估，并且应在2.2至2.25之间。

3. DNA的酶消化

   a） 将200 µg提取的DNA溶解在135 µL的水中。

   b） 向DNA溶液中加入15微升200mM乙酸钠和6单位核酸酶P1（15 µL，1 mg / mL），然后在氩气置换后于37°C孵育30分钟至1小时。

   C） 加入1M Tris-HCl缓冲液（15 µL，pH 7.4）和2单位碱性磷酸酶（7 µL，200单位/0.7mL），在氩气置换后于37°C孵育30分钟至1小时。

   d） 为了除去酶和其他大分子，将水解产物通过Millipore Microcon YM-10（catalog＃42407）在14000rpm下过滤10分钟。

   e） 将50 µL DNA消化液加到ELISA试剂盒的孔中。建议应在一天之内完成此处提到的分析程序。

 注意：

1）经酶处理的样品应在同一天使用。

2）TE缓冲液：1mM EDTA / 10mM Tris-HCl，pH8.0

3）所用的水应通过Chelex（Bio Rad）处理以去除痕量金属离子。

参考文献

1） ML Hamilton，Z Guo，CD Fuller，H Van Remmen，WF Ward，SN Austad，DA Troyer，I Thompson，A Richardson：

使用碘化钠方法可靠地评估核和线粒体DNA中的8-oxo-2-deoxyguanosine水平分离DNA。

核酸研究。Vol.29（10），p2117-2126，2001

2） S丰国等。等：

单克隆抗体N45.1定量免疫组织化学测定8-羟基-2'-脱氧鸟苷：在次氮基三乙酸铁诱导的肾癌模型中的应用。

实验室调查，第一卷。76，No.3，p365-374，1997年

3） M Kakimoto，T Inoguchi，T Sonta，HY Yu，M Imamura，T Etoh，T Hashimoto和H Nawata：

糖尿病大鼠肾脏中8-羟基-2'-脱氧鸟苷的积累和线粒体DNA缺失。

糖尿病卷 51，p1588-1595，2002

4） D Nakae，Y Mizumoto，E Kobayashi，O Noguchi和Y Konishi：

改进的基因组/核DNA提取技术可用于少量大鼠肝组织的8-羟基脱氧鸟苷分析。

癌症通讯。97，p233-239，1995