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什么是测定灵敏度和检测下限（LLD）？

（a）. 灵敏度是分析缓冲液中分析物可以从背景上与背景进行统计学区分的最低值。它是一个计算值，通过比较来自低标准孔和零位的许多重复样品的信号来确定。测定的灵敏度可能高于最低标准点。发现低于测定灵敏度的样品值应被认为太低而无法检测。

（b）. LLD与灵敏度相似，但通过测试天然样品来确定。比较稀释样品和零的重复孔，确定可以从零统计学上区分的最低样品浓度。在大多数情况下，LLD高于灵敏度。

我可以更改标准范围吗？

所有化验均经过测试和设计，可在插页中显示的标准范围内提供准确且可重复的结果。高于或低于这些点的其他点可能无法改善测定性能。标准浓度的变化可能会由于在重要的检测点上没有提供足够的数据而导致不准确。还要记住，测定的灵敏度极限是测试中使用的抗体和缓冲液的函数。只需在曲线的下端添加其他标准浓度，就不会使测试更加灵敏。遵循标准曲线稀释建议，通常将获得最佳结果。

为什么我必须对样品进行乙酰化？

所有DetectX ® 环核苷酸试剂盒（cAMP，K019-H和K019-C以及cGMP，K020-H和K019-C）随附了可用于标准品和样品乙酰化的试剂。这些试剂盒中的特异性抗体对已被乙酰化的核苷酸具有更高的反应性，因此以这种方式处理样品将可以更敏感地测量cAMP或cGMP。但是，乙酰化需要注意几件事。首先，乙酰化试剂将导致样品中的蛋白质和脂质沉淀。仅应稀释已稀释至将在测定中使用的浓度的样品。其次，乙酰化确实增加了该过程的另一步骤。通常，我们建议最初测试样品时不要乙酰化。常规测定非常敏感，无需额外步骤即可分析大多数样品。

为什么必须使用4PL曲线拟合？

四参数逻辑模型（4PLC）最准确地拟合了竞争测定中标准曲线的S形。替代模型（例如线性，指数或对数对数）给出的读数不准确，尤其是在高浓度和低浓度下。大多数酶标仪都可以使用4PLC方法从标准曲线拟合数据。如果不确定，请与读板器的制造商联系。另外，可在www.MyAssays.com上在线找到所有Arbor Assays试剂盒的免费数据分析软件。

CLIA与EIA相比有什么优势？

对于相同的标记物，化学发光分析（CLIA）通常比比色分析（EIA）敏感。例如，cAMP EIA分析（K019-H1 / H5）的灵敏度为5 fmol，而cAMP CLIA分析（K019-C1 / C5）的灵敏度为1 fmol。CLIA分析需要一个能够读取分析发光辉光的读板仪，与光密度的比色读数不同。

如何准备用于GSH测量的样品？

关于我们非常受欢迎的用于测定谷胱甘肽的测定方法（K006-F，K006-H），我们有很多疑问。在这两种测定中，用于定量样品中GSH的检测器也将与样品中存在的任何游离巯基反应。因此，必须首先去除蛋白质或其他潜在的干扰成分。这可以通过用5％5-磺基水杨酸二水合物（SSA）处理所有样品来完成，这会导致较大的蛋白质沉淀，但将谷胱甘肽保留在溶液中。离心后，可以收集上清液，并在测定中测试之前用测定缓冲液稀释至最大1％SSA。在荧光试剂盒（K006-F）中，可以在同一孔中测定还原的GSH和氧化的GSSG。在比色套件（K006-H）中，用2-乙烯基吡啶（2VP）处理样品和标准品（一种可防止还原型谷胱甘肽（GSH）与检测器发生反应的化学物质）可用于测定氧化型谷胱甘肽（GSSG）与存在的任何还原型GSH。要确定游离GSH的浓度，请从与未经2VP处理的相同样品中分别确定的总GSH浓度中减去氧化GSH的浓度。

我需要使用解离试剂吗？

在某些类固醇和其他检测方法中提供了离解试剂，以最大程度地减少某些激素与样品蛋白质的结合。它仅需用于血清或血浆样品，因为这些样品中的类固醇与载体蛋白相关，无法在测定中检测到。唾液，粪便和尿液等基质中的样品不需要解离试剂。大多数用于类固醇分析物的测定均随附一种特殊的解离试剂，该试剂应用于处理血清和血浆样品。该试剂从专门的结合蛋白和其他载体（例如白蛋白）中释放出用于测量的类固醇，这些类固醇在循环时会结合到这些载体上。用解离试剂处理血清和血浆样品后，必须在测试前用测定缓冲液进一步稀释样品。该稀释对于消除解离试剂本身的基质干扰是必需的。在每个测定中检查试剂盒插入物是否建议稀释。

如何确定样品的最佳稀释度？

首先在PubMed中查找类似研究，然后尝试确定正常水平。我们针对大多数经过验证的样品类型优化了推荐的稀释液，以最大程度减少结果中的任何样品干扰。如果您运行的是样本类型，我们没有列出，请先与我们联系，以查看是否有关于该类型的数据。如果不这样做，您可能必须进行线性和加标样品稀释实验，以确定哪种稀释将为您带来线性结果。

什么是矩阵干扰？

除了您要测量的分析物之外，许多样品还包含其他元素，例如蛋白质和脂质，这些元素可能会干扰目标分析物与试剂盒中特定抗体的自由结合。在标准曲线孔中，纯分析物仅溶解在测定缓冲液中，因此不存在那些潜在的干扰组分。执行测定时，您可能会遇到样品孔和标准孔包含完全相同量的分析物的情况，但是样品孔中的其他成分会干扰与特定抗体的结合。结果，即使分析物的数量相同，这些孔也会产生不同数量的信号。

那些未经验证的物种呢？

许多分析物，例如类固醇（皮质酮等），环状核苷酸（cAMP和cGMP）或小脂质（PGE2，PGFM等），无论其来源如何，都是完全相同的。因此，即使没有经过专门测试，来自任何物种的这些分子的样品也应可在EIA或CLIA中使用。此外，可测量样品活性的试剂盒，例如谷胱甘肽-S-转移酶（K008-F1）或PKA（K027-H1）活性测定，或无需使用抗体即可检测分析物的存在，例如一氧化氮（K023-H1）或血红蛋白（K013-H1）检测测定法不受物种特异性相互作用的任何限制，因此可用于任何物种的样品。属于这些类别的所有试剂盒都表示为“多物种”。

我可以使用未经验证的样本类型吗？

在试剂盒开发过程中未经过专门测试的大多数样品类型仍然可以使用，但需要进行测试和优化。样品可能需要稀释或必须提取以消除基质干扰。还必须确定使样品值落在标准曲线范围内的最佳稀释度。最后，如果样品被充分稀释以消除基质干扰后，分析物仍以足够高的浓度存在，使其落在标准曲线范围内，或者可以提取样品并回收可接受量的分析物，那么示例将起作用。

在EIA或CLIA中，NSB，B0和零标准是什么？

（a）. NSB（非特异性结合），它代表来自竞争性免疫测定中非特异性结合的过氧化物酶结合物的信号。该信号由保留在塑料本身上的共轭物和来自基材的背景信号产生。

（b）. B0（与零标准品结合，最大结合孔），代表竞争性EIA或CLIA免疫测定中由特异性抗体捕获的酶产生的最大信号。所有其他标准品和样品均以该值的百分比表示。

（C）. 零标准（夹心测定的背景信号）在免疫测定中，这表示测定的最小信号。零标准成为您标准曲线的一部分。

什么是萃取液，何时应使用？

提取溶液（X123）提供了一些用于测量小肽的试剂盒，可用于纯化原本无法用于这些测定的样品。这种酸性有机溶剂溶液将沉淀蛋白质和其他干扰物质，但将目标分析物留在溶液中。任何可能包含污染物的样品都可以进行处理，但是必须提取血清，血浆和唾液才能从催产素（K048-H，K048-C），精氨酸-加压素（K049-C）或ET获得有用的结果。 -1（K045-H1）分析。为了制备样品，将1体积的样品与1.5体积的提取试剂混合，涡旋，然后混合90分钟。将混合物以1660 g离心20分钟后，将上清液移至另一个试管中，并在SpeedVac中干燥。这一点，样品可以在试剂盒随附的测定缓冲液中重建并在测定中进行测量。请注意，如果需要，还可以使用C18固相色谱柱提取样品。可以在我们网站的资源部分中找到有关该协议的协议。