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琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
货号:H6701 | 规格:100T | 价格:¥0.00 | 品牌:BMASSAY
本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时去除蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp–40 kb大小的片段,回收率大于80%(<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率为30-50 %)。每个吸附柱每次最多可吸附的DNA量约为20 μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。


储存条件:在室温(25℃左右)干燥条件下保存


产品特点:

1 溶胶液PN为亮黄色,便于观察胶是否彻底融化和溶胶体系的pH是否合适。

2 操作快捷,单个样品操作少于15分钟。


产品组成:

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 操作步骤:(如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。)


1 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量。


2 向胶块中加入3倍体积溶胶液PN (如果凝胶重为100mg,其体积可视为100 μl,则加入300μl溶胶液),55℃水浴放置10分钟,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解。


注意:① 如果此时溶胶液变为粉红色,请加入少量3M NaAc pH5.2(一般说来,10μl足矣),使溶胶液变为黄色再上柱离心。②对于高浓度的凝胶(>2%),按照100mg凝胶加入100μl灭菌水和600μl溶胶液PN的比例加入溶胶液PN。③胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。


3 当目的片段<500bp时,如想提高回收效率,向溶胶体系种加入1/3溶胶液PN体积的异丙醇(如使用300μl溶胶液,则加入100μl异丙醇),混匀,55℃温浴1分钟后再进行步骤4。当目的片段>500bp时,省略此步骤,直接进行步骤4。


4 将上一步所得溶液加入到吸附柱CA1中(吸附柱放入收集管中),室温放置2分钟,13,000 rpm离心60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放入收集管中。


注意:① 吸附柱CA1的有效容积为700μl,如溶胶体系体积大于700μl,分次上柱,保证全部溶液都加到吸附柱中。②<100bp和>10kb的片段请在室温放置10分钟,这将会提高回收效率。


5 向吸附柱中加入700μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),13,000 rpm离心60秒,倒掉废液,将吸附柱重新放入收集管中。


6 向吸附柱中加入500μl漂洗液PW,13,000 rpm离心30-60秒,倒掉废液。


7  将离心吸附柱CA1放回收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液。

注意:此步必不可少!如果漂洗液有残留会影响回收效率和DNA质量,进而影响下游实验;离心后将吸附柱盖子打开,室温放置2分钟,这样将有助于彻底挥发残余乙醇。


8 将吸附柱放到一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB(一般不要少于30μl),室温放置2分钟。13,000 rpm离心1分钟收集DNA溶液。

注意:①可将洗脱缓冲液EB预热到70℃后再加到吸附膜上,这样可以提高洗脱效率。② CA1柱的洗脱体积不应少于30 μl,体积过小将会降低回收效率。③洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率


9 DNA产物-20℃保存。


注意事项:

1、电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果,如下一步实验要求较高,则应尽量使用T A E电泳缓冲液。


2、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。


3、回收<100bp及>10kb的DNA片段时,应加大溶胶液的体积,延长吸附和洗脱的时间。


4、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越小,回收率越低。


5、如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

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