BMASSAY®阿尔玛蓝试剂盒(Alamar Blue Kit)是⼀种简便快速、安全可靠的细胞增殖和细胞毒性检测⽅法,适⽤于⾼通量检测实验。该试剂主要成分是⼀种氧化还原指示剂,其在氧化状态下呈现紫蓝⾊⽆荧光性,⽽在还原状态下,转变为呈粉红或红⾊荧光的还原产物,其吸收峰为 530-560nm,发射峰为 590nm。
在细胞增殖过程中,细胞内 NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN 和 NADH/NAD 的⽐值升⾼,处于还原环境。摄⼊细胞内的染料被这些代谢中间体及细胞⾊素类还原后释放到细胞外并溶于培养基中,使培养基从⽆荧光的靛⻘蓝变成有荧光的粉红⾊。最后⽤普通分光光度计或荧光光度计进⾏检测,吸光度和荧光强度与活性细胞数成正⽐。
BMASSAY®Alamar Blue试剂⽆细胞毒性,不影响细胞代谢、细胞因⼦分泌、抗体合成等,检测后的细胞仍然可以进⾏后续实验。其适⽤于细菌、酵⺟类、昆⾍类、⻥类、哺乳类等多种细胞,以及贴壁细胞与⾮贴壁细胞的检测,可以⼴泛⽤于细胞增殖、细胞毒性以及病原微⽣物的快速检测与鉴定。
使⽤⽅法
1. 在待测样品中加⼊10%细胞悬液体积的检测试剂,在细胞培养箱内孵育 2-6⼩时,培养基的颜⾊由靛⻘蓝开始变成粉红⾊即可进⼊下⼀步。
2. 推荐使⽤荧光酶标仪进⾏检测,激发光波⻓在 530-560 nm 之间,发射光波⻓为 590 nm,记录相对荧光单位(RFU)。
3. 绘制标准曲线或细胞⽣⻓曲线:纵座标(Y 轴)为相对荧光单位(RFU);横坐标(X 轴)为细胞数或时间点或药物浓度。
储存条件
4℃避光储存,12 个月内有效。
注意事项
1. 合适密度的细胞可以增加检测灵敏度。对于 96 孔板,建议每孔接种 100 μL 细胞,细胞浓度范围为:贴壁细胞在100-10,000/孔,悬浮细胞在 2,000-50,000/孔,并以培养基为空⽩对照。对于 384 孔板,细胞浓度和接种量均减半。
2. 整个过程均应为⽆菌操作,因为微⽣物污染物同样可以还原检测试剂⽽影响实验结果。
3. 注意接种细胞浓度和加⼊检测试剂后孵育时间。细胞浓度过⾼或孵育时间过⻓,会导致继发性还原反应,产⽣⽆⾊和荧光消失。
4. 孵育时,须避光。
5. 该试剂可以使⽤荧光或分光光度检测,但荧光的灵敏度⾼,实验误差⼩,推荐使⽤荧光检测。