钙在各种细胞中充当通用的第二信使。 生命的开始，受精行为，受Ca2+调节。 所有类型细胞的许多功能都被Ca2+或多或少地调节。 自20世纪20年代以来，科学家们一直试图测量Ca2+，但由于Ca2+探针的有限性，很少有人成功。 Ridgway和Ashley通过将发光蛋白水母发光蛋白注射到藤壶的巨大肌纤维中来进行Ca2+的首次可靠测量。 随后，在20世纪80年代，Tsien及其同事制作了各种荧光指示剂。 其中，基于荧光素的Ca2+试剂（如Fluo-3和Fluo-4）为测量Ca2+提供了值得信赖的方法。 自从这些Ca2+探针发展以来，对Ca2+相关的细胞内现象的研究已经飙升。

自从Fluo-3推出以来，Fluo-3成像及其类似物（如Fluo-4）揭示了Ca2+信号传导中许多基本过程的空间动力学。 Fluo-3和Fluo-4也已广泛用于流式细胞术和基于微孔板（如FLIPR）的钙检测。然而，对于染料提取物的弱信号和高剂量的丙磺舒需要限制了它们在一些细胞分析中的应用，特别是对于那些对丙磺舒敏感的GPCR和钙通道细胞系。我们开发了无色Cal-520系列钙检测试剂，以解决Fluo-3和Fluo-4的这些局限性。

Fluo-3和Fluo-4在细胞应用中最重要的特性是它们的吸收光谱与氩离子激光源在488nm激发相容，并且响应Ca2 +结合的荧光强度增加非常大。使用我们的Cal-520 Ca2+检测试剂保留了这两个有价值的特性。 Cal-520试剂的吸收和发射峰分别为490nm和514nm。它们可以用488nm的氩离子激光很好地激发，并且它们发射的荧光（波长514nm）随着Ca2+的增加而增加。确定Cal-520在与Ca2+结合后经历> 200倍的荧光增加。由于刺激后许多细胞中Ca2+的增加范围通常为5至10倍，因此Cal-520是在该区域中以高灵敏度使用的优异探针。 Cal-520的Kd估计为380nM（22℃，pH 7.0-7.5），但该值可能受pH，粘度和体内条件下结合蛋白的显着影响。

除了方便的488 nm激发波长和钙的大荧光增强外，与包括Fluo-3和Fluo-4在内的所有其他现有荧光钙指示剂相比，Cal-520具有更好的信号背景（S / B）比。此外，Cal-520对位于细胞膜中的有机阴离子转运蛋白具有更强的抵抗力，因此具有比Fluo-3和Flu-4更好的细胞保留特性。这一特性使Cal-520更适合HTS应用。