本试剂盒采用经典的碱裂解法裂解细菌,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合DNA的特性,可以从1–5ml大肠杆菌LB培养液中快速提取3–20μg纯净的高拷贝质粒DNA。提取的质粒可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。然而,对质粒纯度要求更高的转染实验(要求无内毒素),此试剂盒不能达到要求。另外,尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒(>10kb),但我们不推荐使用。如果一定要使用,请参考以下方法:加大菌体使用量(使用5–10 ml过夜培养物),同时按照比例增加P1、P2、P3的用量;洗脱缓冲液应在70℃预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率,其它步骤相同。
储存条件:在室温(25℃左右)干燥条件下,可保存1年;更长时间的保存可置于2–8℃。
产品特点:
1.使用了Lysis Dye,菌体裂解是否完全一目了然。由于判断菌体裂解和中和是否彻底更主要取决于操作者的经验,所以我们增加了Lysis Dye(一种能使裂解/中和体系变换颜色的试剂)来帮助观察裂解/中和的程度。加入P1后,Lysis Dye使菌液变为浑浊的红色;加入P2后,Lysis Dye立即使溶液变为澄清的红色,裂解是否完全只要观察红色溶液是否澄清,如果红色非常均一,表明裂解充分;在完全裂解的体系中加入P3混匀后,体系立即变为黄色,任何红色的残留表明没有完全混匀或者中和不彻底。
2 .增加了去蛋白液PD,能更加彻底地去除蛋白污染,得到纯度更高的质粒。
产品组成:
使用说明:
1 将试剂盒附带的RNase A全部加入到溶液P1中(如15ml P1中加入150μl RNase A),混匀后4℃贮存。
2 按照标签所示在漂洗液PW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3 每次使用前请检查溶液P2,溶液P3和去蛋白液PD是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。