对珍贵的RNA样本进行无限次real-time PCR分析

Features

高cDNA产量用于无限次分析和长期保存

均一扩增所有cDNA和所有转录本区段

经优化的试剂，快速简单的操作流程

Product Details

QuantiTect Whole Transcriptome Kit对有限的RNA样品进行预扩增和逆转录，获得高产量cDNA，用于无限次real-time PCR基因表达分析。该试剂盒包含全转录扩增所需的全部酶和缓冲液。对Phi29聚合酶创新的修饰确保从低至1 ng RNA中制备多至40 μg cDNA。该聚合酶独特的加工过程可制备高度统一的cDNA，确保通过real-time PCR进行可靠的基因表达分析。

Performance

QuantiTect Whole Transcriptome Kit确保所有转录子高度一致的扩增，这对于基因表达分析是必需的。所有mRNA转录子以相同的形式同时在5'和3'末端扩增。

可获得多至40 μg的可重复、高产量的cDNA。能够进行无限次real-time PCR分析，并具有高度重复性的CT值。此外，由于cDNA比RNA更稳定，可以存档用于以后的研究工作。

高产量的cDNA可用于real-time PCR分析

起始材料        扩增时间 扩增产物的常规产量     可进行的real-time PCR次数*

10 ng RNA 2小时 至多10 µg cDNA     1000

10 ng RNA 8小时 至多40 µg cDNA     4000

* 从一次QuantiTect whole transcriptome amplification (WTA)扩增反应得到的cDNA可进行的real-time PCR次数。不使用WTA，10 ng RNA只能进行一次可靠的real-time RT-PCR分析。

Principle

获得的生物样本量太少可能限制基因表达谱分析。使用QuantiTect Whole Transcriptome Kit可对少量珍贵的样品进行无限次real-time PCR分析。QuantiTect Whole Transcriptome Kit经优化，用于1 ng RNA或相当于约50个细胞RNA的全转录扩增，甚至可以用更少量的RNA，这些取决于RNA的品质和转录子的丰度。

QuantiTect Whole Transcriptome Kit含有逆转录酶、DNA聚合酶和优化的缓冲液及试剂，可对一个RNA样本的所有转录本进行扩增。此试剂盒整合了经质量验证的REPLI-g技术，通过非偏向序列扩增来合成cDNA。REPLI-g扩增采用Multiple Displacement Amplification（MDA）技术，应用独特加工的DNA聚合酶实现等温扩增。该技术确保包括5’末端在内的所有转录区的同等扩增，从而获得可用于real-time PCR的足够多的cDNA。

Procedure

从总RNA开始经过3个步骤可获得大量代表了整个转录子的cDNA。首先，应用优化的含有T-Script Enzyme的逆转录混合物（含有随机引物和oligo-dT引物）将RNA转录为cDNA。用高效的连接混合物连接，然后用基于经验证的REPLI-g技术的扩增混合物扩增cDNA。

Applications

QuantiTect Whole Transcriptome Kit制备的cDNA可用于QuantiFast或Rotor-Gene Kits进行的real-time PCR分析，且可以储存用于以后的分析，但不适用于微阵列分析。QIAGEN提供REPLI-g Kits and Service，用于小量或珍贵样品的全基因组扩增。扩增高度一致，具有最小的序列偏好，可制备适合于基因分型和Comparative Genome Hybridization等应用的DNA。