用于评估Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪的性能

Features

配合Rotor-Gene预混液评估Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪的性能

确定Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪的精确度和可重复性

包含所有组分的完整系统

Product Details

Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit配合Rotor-Gene预混液，用于展现Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪的性能。试剂盒包含所有需要的反应组分，来通过SYBR Green-based real-time PCR对基因组DNA靶标进行定量。这包括预稀释的基因组DNA标准物、2个未知样本、优化的预混液和人G蛋白耦联雌激素受体1（GPER）基因的特异性引物对。使用此试剂盒可评估Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪进行基因定量时的可靠性、可重复性和灵敏度。

Principle

Rotor-Gene Kits配合Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪可完成高精度real-time PCR。Rotor-Gene Kits中提供的即用型预混液可快速、准确的进行基因定量，无需反应优化，而Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪采用独特的离心转子设计。PCR管放置到转子中，离心的PCR管穿过一道激发光源和一个流动空气腔内的检测器。这意味着管间几乎没有光照和温度变化，使real-time PCR定量分析具有高精度。此外，由于转子离心速度持续在400 rpm，使高速数据采集成为可能。

使用Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit可确保高度特异性的扩增，离子的平衡组合可减少非特异性引物退火。使用Q-Bond可进行快速循环，不影响性能，Q-Bond是一种新颖的PCR添加剂，使PCR运行时间可少至45分钟。

Procedure

使用Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit进行SYBR Green法real-time PCR，可定量不同的基因组DNA靶标的拷贝数。每个反应包含：

特定拷贝数的人基因组DNA模板

Rotor-Gene SYBR Green PCR Master Mix

特异性分析人G蛋白耦联雌激素受体1（GPER）基因的QuantiTect Primer Assay

Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit手册包含3个实验方案。Rotor-Gene用户可选用手工反应体系构建的实验方案或使用QIAgility自动化反应体系构建的实验方案。反应体系构建后，用户可选择在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行real-time PCR的实验方案。

使用QIAgility可避免手工移液步骤，紧凑的台式仪器可进行快速、高精度的PCR反应体系构建，可减少或消除由于人为失误造成的反应体系构建错误。QIAgility可配合Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪和Rotor-Gene Kits使用，可简单分装液体到单管、联管和Rotor-Discs。

通过一套标准物（2000、1000、500、250和125个拷贝；每个标准物有4个平行分析）的CT值可产生一条标准曲线。标准曲线用来确定2个未知样本（500和250个拷贝；每个未知样本有24个重复[当手工反应体系构建时，每个未知样本可最少有4个重复]）的拷贝数。此外，还进行4个无模板对照（NTC）反应。因此，在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上有72个反应同时进行。

Applications

Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit用于评估Rotor-Gene Kits配合Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪的性能。此试剂盒与Rotor-Gene 3000或Rotor-Gene 6000兼容。使用此试剂盒可评估Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪在基因定量时的精确度和可重复性。

Supporting data and figures

Specific primer annealing.

Cations in the Rotor-Gene Q PCR buffer increase specific primer annealing. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing primer annealing. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.