RNeasy FFPE Kit

从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA; 50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes, Proteinase K, RNase-Free DNase I, DNase Booster Buffer, RNase-Free Buffers, RNase-Free Water.

Features

创新的方法用于克服福尔马林造成的交联

有效的释放RNA而不破坏其完整性

高效的实验方案，在85分钟内即可获得纯化的RNA

Product Details

RNeasy FFPE Kit专为从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA而设计。独特的裂解和孵育条件逆转福尔马林对RNA的修饰。并且裂解缓冲液可将RNA从组织切片中有效释放出来，防止RNA的进一步降解。试剂盒同样使用DNase和DNase Booster Buffer优化，去除基因组DNA的污染。使用RNeasy MinElute离心柱纯化获得的总RNA，洗脱体积可小至10 μl。整个纯化流程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。

Performance

使用RNeasy FFPE Kit从固定和包埋的样本中纯化获得的RNA的产量比用其他方法更高。回收得到的完整RNA最小可达70 nt，并且几乎没有基因组DNA的污染。用该试剂盒从FFPE样本中纯化得到的RNA片段非常适用于real-time RT-PCR等敏感的下游应用。

Principle

用福尔马林固定组织会导致RNA-RNA和RNA-蛋白质的交联，这会影响RNA在酶学分析中的性能。FFPE样本固定和包埋同样会导致核酸的严重片段化。RNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件来逆转福尔马林对RNA的修饰。裂解缓冲液能使RNA从FFPE组织样本中有效释放，并防止进一步的RNA降解。经优化的条件能纯化得到所有可用的RNA，使用RNeasy FFPE Kit从FFPE样本中得到的RNA的产量比其他方法更高。

Procedure

整个RNeasy FFPE操作流程可在85分钟内完成。使用蛋白酶K裂解样本仅需15分钟。裂解后，样本在80ºC下孵育15分钟。之后，用DNase处理能有效去除样本中的基因组DNA，包括小的DNA片段。最后，使用RNeasy MinElute离心柱即可收集纯化的RNA，洗脱体积14–30 µl。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。

Applications

RNeasy FFPE Kit可纯化FFPE 样本中所有大于70 nt RNA，得到适用于RT-PCR等众多下游应用的RNA片段。但是，从FFPE样本中纯化得到的RNA会严重片段化，不能用于需要完整RNA的下游应用。如果使用片段化RNA可能需要做些修饰（例如在RT-PCR时设计小的扩增子）。进行cDNA合成时，不能使用oligo-dT引物，而要使用随机或基因特异性引物。

Supporting data and figures

Reliable results in real-time RT-PCR analysis.

Total RNA was purified from a 10 µm rat lung FFPE sample using the RNeasy FFPE Kit or alternative kits from Supplier EIII, Supplier N, Supplier AIV, and Supplier M. Real-time RT-PCR assays for PGK1 (phosphoglycerate kinase 1) were performed on the Rotor-Gene Q cycler with (+RT) or without (-RT) the reverse transcription step. The high CT value in the -RT sample from the RNeasy FFPE Kit indicates that purified RNA is virtually free of genomic DNA. Therefore the CT value in the +RT sample from the RNeasy FFPE Kit is a reliable measure of RNA expression.

Specifications

Features                                            Specifications

Applications                                    PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray

Elution volume                            14–30 µl

Main sample type                            FFPE tissue samples

Processing                                    Manual (centrifugation), automated (QIAcube)

Format                                            Spin column

Purification of total RNA, miRNA, 

poly A+ mRNA, DNA or protein    RNA

Time per run or per prep            70 minutes

Sample amount                                 1*5 µm to 4*10µm sections

Technology                                    Silica technology

Yield                                            Varies