DNA退火缓冲液(Annealing Buffer for DNA Oligos),即DNA寡核苷酸退火缓冲液,该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA Oligo的退火,而且特别适合于较难退火的用于siRNA质粒构建的DNA Oligo的退火。由于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,自身易形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用DNA退火缓冲液(5×)可以有效避免DNA Oligo自身形成发夹结构,并且两条Oligo退火后可以直接和经酶切纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
产品组成及特点:主要由氯化钾、Tris、氯化镁等组成,经高压灭菌处理。操作简单,只需把待退火的 DNA Oligo 和 DNA 退火缓冲液(5×)按照一定比例混合后,置于 PCR 仪上,约 60 分钟即可完成。
储存条件: -20℃
操作步骤(仅供参考):
1. 用去离子水将 DNA 退火缓冲液(5×)稀释成 1×工作浓度。
2. 用 DNA 退火缓冲液(1×)分别溶解互补的两条 DNA 寡核苷酸单链,使它们的摩尔浓度相等;
3. 取相同体积的步骤 2 中得到的寡核苷酸单链溶液混合,置于 PCR 反应管中,样品不要用矿物油覆盖。
4. 将 PCR 反应管置于 PCR 仪中,设置反应条件: 95℃变性 2min;缓慢降温至 25℃,降温过程用时至少 45min;产物可 4℃短暂保存,用于后续实验。长期保存可于-20℃冻存。
注意事项:
1、DNA 退火缓冲液(5X) 只适合于 DNA oligo 的退火,不能用于 RNA oligo 的退火。
2、该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。