本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,能提取多种植物细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
储存条件:在室温(25℃左右)干燥条件下保存
试剂盒组成:
提取得率:
准备工作:
1. 准备液氮;65℃水浴;无水乙醇;1.5ml灭菌离心管。
2. 按照标签所示在缓冲液AP3和漂洗液PW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液AP1,缓冲液AP2和缓冲液AP3是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
操作步骤:
1、植物组织预处理:取新鲜植物组织(不超过 100mg)或干重组织(不超过 20mg),于液氮中充分研磨至细粉状,让液氮自然挥发。
2、将研磨好的植物组织粉末迅速转移到预先装有 400ul 溶液 PA、20ul RNase A(10mg/ml)和 5ul β-巯基乙醇的离心管中,充分颠倒混匀,室温放置 10min。
3、加入 140ul 溶液 PB,充分颠倒混匀,12000rpm 离心 10min,将上清转移至新离心管中(约 400-500ul),注意不要吸入沉淀。
4、加入和上清相同体积的溶液 PC,充分颠倒混匀,再加入和溶液 PC 相同体积的无水乙醇,此时若出现絮状物,将絮状物吹散后一起加入吸附柱中,12000rpm 离心 5min,弃废液,一次加不完可分两次加入。
注意:如果吸附柱膜呈绿色或离心时有堵塞现象,可向吸附柱中加入 600ul 无水乙醇,并适当延长离心时间。
5、 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放回收集管。
6、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放回收集管中, 12000rpm 离心 2min。
7、将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟,否则残余的乙醇可能会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
8、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置1-5min,12000rpm 离心 2min,即可得到高质量的植物基因组 DNA。
9、(可选)离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置 2min,12000rpm 离心 2min。
注意事项:
1、组织应尽量选取新鲜幼嫩样本,富含多糖多酚的组织可能会提取失败,请选用多糖多酚专用试剂盒。
2、如果试剂盒中的试剂出现沉淀,可在 65℃水浴中融化,不影响使用。
3、洗脱缓冲液的体积不能小于 50ul,DNA 产物应-20℃保存。
4、使用前先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。