本产品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可最大限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA片段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通过平滑末端克隆法进行克隆。
产品组成(2×):
20 mM Tris-HCl (pH 8.3)
100 mM KCl
3mM MgCl2
500uM dNTP each
0.1U Polymerase/ul
ddH2O
其它稳定剂和增强剂
储存条件:-20℃
应用举例:
1、按下面配制 50ul PCR 反应体系
Template <1ug
Primer1(10uM) 2ul
Primer2(10uM) 2ul
2×MasterMix 25ul
ddH2O up to 50ul
2、PCR 反应循环设置
94℃ 3min
94℃ 30sec
55℃ 30sec 30 cycles
72℃ 500-2000bp/1min
72℃ 5min
3、结果检测:反应结束后,取 5ul 反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。
注:
1、以50μl PCR反应体系为例,每次使用25μl 2×MasterMix,500μl可做20次 50μl PCR反应。
2、使用含染料的2×MasterMix可以直接上样;不含染料的2×MasterMix要与6×loading buffer混合后上样。