本试剂盒采用经典的碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合DNA的特性，可以从1–5ml大肠杆菌LB培养液中快速提取3–20μg纯净的高拷贝质粒DNA。提取的质粒可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。然而，对质粒纯度要求更高的转染实验（要求无内毒素），此试剂盒不能达到要求。另外，尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒（>10kb），但我们不推荐使用。如果一定要使用，请参考以下方法：加大菌体使用量（使用5–10 ml过夜培养物），同时按照比例增加P1、P2、P3的用量；洗脱缓冲液应在70℃预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率，其它步骤相同。

产品组成：

储存条件：在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2–8℃。

使用说明：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入），混匀，置于 2-8℃保存。如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤（仅供参考）:

1、取 1-5mL 细菌培养物，12000rpm 离心 1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 250μL 溶液Ⅰ(请先检查是否已加入 RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入 250μL 溶液Ⅱ，温和地上下翻转 6-8 次使菌体充分裂解。注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组 DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过 5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 350μL 溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转 6-8 次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm 离心 10 min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。

注意：溶液Ⅲ加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

5、将上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室温放置 2min，12000rpm 离心 1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入 600μL 漂洗液Ⅰ(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入 700μL 漂洗液Ⅱ(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8、向吸附柱中加入 500μL 漂洗液Ⅱ，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9、12000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

10、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200μL 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 2min，12000rpm 离心 1min。

11、为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置 2min，12000rpm离心 1min。

注意事项:

1、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、漂洗液Ⅰ和漂洗液Ⅱ使用后应立即拧紧盖子。

2、洗脱缓冲液体积不应少于 50μL，体积过小影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影晌，若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围)，pH 值低于 7. 0 会降低洗脱效率，DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。

3、 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，使用 5-10mL 过夜培养物，同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。

4、DNA 浓度及纯度检测：得到的质粒 DNA 纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的 DNA 可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA 应在 OD260处有显著吸收峰，OD260值为 1 相当于大约 50ug/mL 双链 DNA、 40ug/mL 单链 DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响吸光值，但并不表示纯度低。