该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的真菌样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。新鲜或干燥的真菌组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
真菌是具有真核和细胞壁的异养生物,种属很多,已报道的属达 1 万以上,种超过 10 万个。真菌通常又分为三类,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。对于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠处理,而对于大型真菌,可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液,用硅质膜吸附,即可得到高纯度的基因组。
储存温度:室温(15℃-25℃) 干燥保存,2℃-8℃保存时间更长。
产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
注意事项:
1. 由于真菌种类万千,对于一些特别难处理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振荡,蛋白酶 K 处理,一般都可以得到一定量的基因组 DNA,如电泳检测很弱,一般 PCR 都会有较好结果。
2. 若溶液 A 或溶液 B 中有沉淀,可在 55℃水浴中重新溶解。
3. 如果 DNA 提取量很少,可加长玻璃珠处理时间,如果提取 DNA 成弥散短条带,可减少玻璃珠处理时间。
4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围),pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。
5. DNA 浓度及纯度检测:得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD260处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链 DNA、40 μg/ml 单链 DNA。OD260/OD280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
6. 在确保样品无误的情况下,如经过多次试验,都无法提出 DNA,请将部分样品寄至我公司,我们代为摸索优化条件,以使您的实验能够正常进行下去。